DNA甲基化是一种重要的表观遗传学修饰，它在基因调控、发育和疾病中起着关键作用。为了理解DNA甲基化的模式和功能，科学家们打造了多种测序方法来研究DNA的甲基化状态。其中之一是Reduced Representation Bisulfite Sequencing(RRBS)测序。
RRBS测序的工作原理
1、 从研究样本(常常是生物组织或细胞)中提取DNA。这可以经过标准的DNA提取方法来完成。
2、 提取的DNA接下来会被酶切成小片段。与全基因组测序不同，RRBS只会切割一小部分基因组区域。常常，RRBS选择性地酶切那些CpG岛附近的DNA区域，因为这些地方常常富含DNA甲基化。
3、 切割后的DNA片段需要接受甲基化处理，常常是经过处理化学物质二硫亚矾酸(sodium bisulfite)来实现的。这个步骤会将未甲基化的胞嘧啶(Cytosine，C)转化为硫代胞嘧啶(Thymine，T)，而已甲基化的C则保持不变。
4、 处理后的DNA片段经过PCR扩增，然后经过高通量测序技术进行测序。由于RRBS只测序了特定的DNA片段，因此可以获得更低成本的测序数据。
5、 测序数据随后会进行分析，以确定每个CpG位点的甲基化状态。经过比较测序结果中的T和C，可以确定每个CpG位点是否被甲基化。
RRBS测序的应用
1、 RRBS是研究DNA甲基化的主要工具之一。科学家可以使用RRBS来调查DNA甲基化与基因调控、发育和疾病之间的关系。
2、 DNA甲基化在癌症的发生和发展中起着关键作用。RRBS可用于比较正常组织和癌症组织中的DNA甲基化差异，因而有利于识别潜在的癌症驱动因子。
3、 RRBS可以用来研究胚胎发育和分化过程中的DNA甲基化动态变化。这有利于理解细胞命运决定和分化机制。
4、 RRBS可以用于评估环境暴露(如毒物或营养)对DNA甲基化的影响，帮助我们了解环境因素与健康之间的联系。
